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關于細胞分離試劑盒

更新時間:2022-12-22      點擊次數:249

過研究體內組(zu)織來(lai)源的(de)(de)(de)(de)細胞(bao)(bao)(bao)(bao),可以(yi)對(dui)(dui)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)學(xue)(xue)和(he)功(gong)能進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)有效(xiao)的(de)(de)(de)(de)預測,但這需要對(dui)(dui)靶(ba)標(biao)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)群(qun)體(ti)進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)分離,否則生(sheng)物(wu)(wu)學(xue)(xue)的(de)(de)(de)(de)復雜性(xing)(xing)可能導(dao)致結果混淆。為(wei)了對(dui)(dui)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)表型進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)研(yan)究(jiu),目前已(yi)開發出(chu)多種基于明確特(te)征(zheng)對(dui)(dui)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)群(qun)體(ti)進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)分離的(de)(de)(de)(de)不(bu)(bu)同方法。對(dui)(dui)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)群(qun)體(ti)進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)分離不(bu)(bu)僅有助于生(sheng)物(wu)(wu)學(xue)(xue)研(yan)究(jiu),而且也能促進(jin)(jin)臨床上的(de)(de)(de)(de)診斷性(xing)(xing)檢測。有效(xiao)的(de)(de)(de)(de)分離方法應具備(bei)出(chu)色的(de)(de)(de)(de)產量、純度和(he)活力(li)。可通(tong)過正(zheng)向選(xuan)擇(ze)(通(tong)常采用結合細胞(bao)(bao)(bao)(bao)特(te)異性(xing)(xing)標(biao)志物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)體(ti))或(huo)負向選(xuan)擇(ze)(基于生(sheng)物(wu)(wu)物(wu)(wu)理(li)特(te)性(xing)(xing)將不(bu)(bu)需要的(de)(de)(de)(de)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)去(qu)除從而富集靶(ba)標(biao)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)群(qun)體(ti))來(lai)實現對(dui)(dui)靶(ba)標(biao)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)群(qun)體(ti)的(de)(de)(de)(de)富集或(huo)純化。

長期以來(lai),將細(xi)(xi)(xi)(xi)胞分(fen)(fen)離(li)成(cheng)各種亞細(xi)(xi)(xi)(xi)胞成(cheng)分(fen)(fen)一直都(dou)是(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞生(sheng)物(wu)學(xue)研(yan)究(jiu)的(de)基礎(chu)。亞細(xi)(xi)(xi)(xi)胞分(fen)(fen)離(li)技術已廣(guang)泛用(yong)(yong)(yong)于(yu)研(yan)究(jiu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞器和(he)亞細(xi)(xi)(xi)(xi)胞區(qu)室的(de)結構和(he)功能(neng),以及了解生(sheng)物(wu)分(fen)(fen)子(zi)的(de)定位(wei)、加工(gong)和(he)運輸。大(da)多數(shu)分(fen)(fen)離(li)技術都(dou)旨在獲(huo)得(de)處于(yu)功能(neng)性(xing)狀態的(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞器和(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞大(da)分(fen)(fen)子(zi),此時(shi)它們(men)仍保留其固(gu)有的(de)生(sheng)化特性(xing)。這(zhe)通常通過采用(yong)(yong)(yong)溫和(he)的(de)機(ji)械(xie)方法或使用(yong)(yong)(yong)溫和(he)的(de)去污(wu)劑進行(xing)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞裂解,然后通過差異離(li)心(xin)將細(xi)(xi)(xi)(xi)胞成(cheng)分(fen)(fen)進行(xing)分(fen)(fen)離(li)來(lai)實現(xian)。

基于表型的細胞分離

為了評估(gu)脂(zhi)質裂解、細胞信(xin)號轉導、內分(fen)泌功(gong)能和代謝(xie)活性,可(ke)以(yi)使用前脂(zhi)肪細胞來研究(jiu)脂(zhi)肪形成和分(fen)化后的過程。

我們的前脂(zhi)肪細胞(bao)分離試(shi)劑盒包(bao)含了從脂(zhi)肪組(zu)織中分(fen)(fen)離基質血管(guan)(guan)細胞(bao)成(cheng)分(fen)(fen)所需的工(gong)具(ju)和試劑(ji)。所得到的基質血管(guan)(guan)成(cheng)分(fen)(fen)將會培(pei)養在前(qian)脂(zhi)肪細胞(bao)所粘附的組(zu)織培(pei)養板上。前(qian)脂(zhi)肪細胞(bao)保留了增殖以及在使用誘導分(fen)(fen)化成(cheng)分(fen)(fen)處理時(shi)可分(fen)(fen)化為(wei)脂(zhi)肪細胞(bao)的能力(li)。

細胞器和亞細胞復合物的分離

亞細胞成(cheng)(cheng)分(fen)的(de)衍生(sheng)可促進對細胞器功能的(de)理解(jie),并催(cui)生(sheng)新的(de)生(sheng)物技術(shu)。例如,從哺(bu)乳(ru)動(dong)物細胞中分(fen)離出(chu)(chu)的(de)細胞核(he)可后續用(yong)于合(he)成(cheng)(cheng)內源性RNA初級(ji)轉錄本。我們已(yi)開發出(chu)(chu)了(le)高產(chan)量(liang)的(de)Nuclei EZ Prep試(shi)劑(ji)盒,可快速(su)分(fen)離出(chu)(chu)大多數哺(bu)乳(ru)動(dong)物的(de)細胞核(he)。

為(wei)了檢測線(xian)粒體(ti)的(de)完整(zheng)性(xing)和膜電位(wei),我們的(de)線(xian)粒體(ti)染(ran)色試劑盒使用了JC-1染(ran)料,其會集中(zhong)在(zai)線(xian)粒體(ti)基質中(zhong)并形成紅色熒光(guang)團(tuan)。細胞凋亡等能夠(gou)消耗線(xian)粒體(ti)膜電位(wei)的(de)事件會阻止(zhi)JC-1染(ran)料在(zai)線(xian)粒體(ti)中(zhong)的(de)積累,因此可(ke)利用熒光(guang)顯(xian)微鏡來區分具(ju)有活(huo)力的(de)線(xian)粒體(ti)和受(shou)損(sun)的(de)線(xian)粒體(ti)。

另(ling)外,也可(ke)分離非細胞(bao)器的(de)亞細胞(bao)復合物(如蛋(dan)(dan)白(bai)酶體),將其用(yong)于蛋(dan)(dan)白(bai)水解測定。我們使用(yong)含有(you)一段GST融(rong)合蛋(dan)(dan)白(bai)的(de)親和基(ji)質微珠(zhu)進(jin)行分離,該融(rong)合蛋(dan)(dan)白(bai)具有(you)可(ke)與(yu)GST-瓊脂(zhi)糖(tang)結(jie)合的(de)泛素樣結(jie)構(gou)域。

細胞骨架富集

傳統上,研究與肌動蛋白細胞骨架相關的蛋白都很棘手,因為細胞骨架元素不溶于類似于Triton X-100的去污劑。Millipore ProteoExtract細胞(bao)骨(gu)架富集(ji)和分離試劑盒帶有細胞(bao)(bao)骨架純化(hua)緩沖液(ye),能夠保留粘著斑和肌動蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)相關蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)并同時(shi)從細胞(bao)(bao)中去除可(ke)溶性細胞(bao)(bao)質和核蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)。該(gai)方法可(ke)增強檢測并研究(jiu)低(di)豐度肌動蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)相關蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的能力,而這些蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)在使用(yong)Western blotting分析全(quan)細胞(bao)(bao)裂解物時(shi)通常會被(bei)掩蓋掉。



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