傳統流式細胞術在蛋白(bai)質互作和低豐(feng)度蛋白(bai)檢測方面能力受限(xian)。我(wo)們將流式細胞術與Duolink®鄰(lin)位連接技術（PLA）結合在一(yi)起，實現(xian)了(le)蛋白互作流式分(fen)析。Duolink® flowPLA檢測試(shi)劑盒(he)通過增強靈敏度可以檢測細(xi)胞群中的(de)低豐度靶(ba)蛋白。該實驗(yan)方(fang)案(an)易于操作，可適配任意(yi)流式細(xi)胞儀來提供可直接發表(biao)的(de)實驗(yan)結果。

Duolink® flowPLA檢(jian)測(ce)試劑盒可進行40次(ci)反應，每次(ci)需100,000細胞溶于100 µL反應液中。試劑盒組分包(bao)含：

1.連接原液(ye)(5X) – 稀(xi)釋配制1X連接緩沖液

2.連(lian)接酶(1 U/μL) – 添加配(pei)制連接(jie)液

3.擴增原液(ye)(5X) – 稀(xi)釋配制1X擴增緩沖液(ye)

4.聚合(he)酶(10 U/μL) – 添加配(pei)制(zhi)擴(kuo)增液

5.檢(jian)測原液(ye)(5X) – 稀釋配制1X檢測緩沖液

Duolink®鄰位(wei)連接檢(jian)測(ce)（PLA）實現了對內(nei)源(yuan)性蛋白質-蛋白(bai)質相(xiang)互(hu)作用（PPI）和翻(fan)譯后(hou)修飾的研究，為單(dan)一事件提供了(le)可通過顯微鏡或流式細胞儀進(jin)行可視(shi)化(hua)的熒(ying)光(guang)信號。為了(le)實現對蛋(dan)白質(zhi)間(jian)相互作用的研究，Duolink® PLA技術(shu)使(shi)用了(le)一對帶有寡核苷酸標(biao)記的抗(kang)體，當它們相距在40nm以內時，可進(jin)行滾(gun)圈擴(kuo)增(zeng)并在添(tian)加標記探針(zhen)后產生特異性(xing)熒光信(xin)號。

Duolink® PLA可提供四種不同(tong)顏色的熒光用于流式細胞(bao)儀和(he)顯(xian)微鏡檢測，對細胞(bao)中多(duo)組蛋(dan)白質間的相互作用實(shi)現可視化。借助Duolink® PLA技術的放(fang)大(da)能力和諸多(duo)優勢，發現任何科研突破機會：

1.可視化蛋白互作——包括穩定和瞬時兩種

2.可視化翻譯(yi)后修(xiu)飾

3.檢測(ce)內源蛋白——無需表達或(huo)遺(yi)傳(chuan)操作(zuo)

4.高特(te)異性——使用(yong)兩種抗(kang)體/探針消(xiao)除假陽性

5.無(wu)需特殊(shu)設備——可提供基于標(biao)準免疫熒光(guang)和流式細胞術的(de)方法